Արյան գլյուկոզի քանակական որոշումը գլյուկոզի օքսիդազի մեթոդով

Մեթոդի սկզբունքը: Մեթոդը հիմնված է գլյուկոզի օքսիդազ ֆերմենտի գործողության առանձնահատկության վրա: Այս ֆերմենտը օքսիդացնում է գլյուկոզան մոլեկուլային թթվածնի առկայության դեպքում `գլյուկոնոլակտոն կազմելու համար, որը ինքնաբուխ հիդրոլիզացնում է գլյուկոնիկ թթուն: Գլյուկոզա օքսիդազը օքսիդացնում է գլյուկոզան ՝ ջրածնի պերօքսիդ ձևավորելու համար (Հ₂Օ₂), որը արձագանքում է 4-aminoantipyrine- ի և ֆենոլի հետ `պերօքսիդազի գործողության ներքո: Արդյունքում ձևավորվում է վարդագույն գունավոր միացություն, որի օպտիկական խտությունը 510 նմ-ով համաչափ է նմուշում գլյուկոզայի կոնցենտրացիայի հետ:

գլյուկոզա + O₂ + Հ₂Օ Գլյուկոնիկ թթու + Հ₂Օ₂

2 Ն₂Օ₂ + 4-ամինոանտիպիրին + ֆենոլ Quinonymine + 4H₂Օ

Սարքավորումներ CPK, ցենտրիֆուգ, ջերմոստատ, դարակաշարեր, փորձարկման խողովակներ, պղպեղներ, կենսաբանական նյութեր, ռեակտիվներ, որոնք պարունակվում են աշխատանքային լուծույթում:

փորձարարական նմուշ, մլ

ստանդարտ նմուշ, մլ

պարապ փորձություն (N₂O), մլ

Գլյուկոզայի տրամաչափման լուծույթ (հղում)

Խողովակները տեղադրվում են ջերմաչափի մեջ 37 ° C- ում 15 րոպե, այնուհետև գունավորվում են CPC- ի վրա, կանաչ ֆիլտրով, փափկամիսներով, 5 մմ շերտի հաստությամբ `դատարկ նմուշի դիմաց (N₂Ո): Ինկուբացիայից հետո 1 ժամվա ընթացքում վարդագույն գույնը կայուն է:

Հաշվարկ գլյուկոզայի պարունակությունը արտադրվում է բանաձևով.

Գ =x C ստանդարտ, որտեղ

C- ն է գլյուկոզայի պարունակությունը փորձարարական նմուշում, մոլ / լ,

Էop - նմուշի օպտիկական խտությունը,

Ուտում - տրամաչափման նմուշի օպտիկական խտությունը,

C ստանդարտ - պարունակությունը տրամաչափման լուծույթում, մոլ / լ:

Նորմալ արժեքներ.  նորածիններ `2.8-4.4 մմոլ / լ

 երեխաներ `3,9 -5,8 մմոլ / լ

Մեծահասակները `3,9 - 6,2 մմոլ / լ

Հիպոգլիկեմիա (GHC):Արյան գլյուկոզի բարձրացումը պայմանավորված է բազմաթիվ պատճառներով, համաձայն որոնց ՝ առանձնանում են հիպերգլիկեմիայի երկու խմբերը:

1. Մեկուսիչ - կապված մարմնի անբավարար ինսուլինի հետ կամ դրա գործողության անարդյունավետության պատճառով:

2. Extrainsular (արտամղիչ) - կախված չեն ինսուլինի ազդեցությունից:

Հետևյալ գործընթացներն առավել նշանակալից են HHC- ների ձևավորման մեջ. Գլիկոգենի տրոհման ավելացում, նորոգլոգոգենեզի բարձրացում, գլիկոգենի սինթեզի արգելակումը, հյուսվածքային գլյուկոզի օգտագործումը նվազեցված հորմոնալ ինսուլինի հակագերությունների ազդեցության տակ. Սոմատոտրոպին, գլյուկորտիկոիդներ, թիրոքսին, թիրոտրոպին:

Ալիենտային հիպերգլիկեմիան նշվում է արյան մեջ գլյուկոզի ավելցուկ ընդունմամբ (օրինակ ՝ հիպերգլիկեմիա ՝ շաքարի բեռով): «Հեպատիկ» հիպերգլիկեմիան առաջանում է լյարդի դիֆուզիոն վնասվածքներով:

Հանգիստ և ծանր հիպերգլիկեմիան ամենից հաճախ ուղեկցվում է շաքարախտով: Սովորական է մեկուսացնել ինսուլինից կախված շաքարախտը և ոչ ինսուլինից կախված շաքարախտը, կամ, համապատասխանաբար, I տիպի շաքարախտը և II տիպի շաքարախտը: I տիպի շաքարախտի ձևավորումը կապված է հիմնականում ինսուլինի թույլ սինթեզի և նյութափոխանակության հետ:

Հիպերգլիկեմիայի երկրորդ խումբը կապված է հիմնականում հորմոններ արտադրող էնդոկրին խցուկների հիպերֆունկցիայի հետ - ինսուլինի հակագոնիստներ: Այն նկատվում է այնպիսի հիվանդությունների մեջ, ինչպիսիք են Իրսենկո-Քուշինգի սինդրոմը և հիվանդությունը, ակրոմեգալիան, թիրոտոքսիկոզը, ֆեոխրոմոցիտոման, գլյուկոգանոման: Արյան գլյուկոզի մակարդակը բարձրանում է լյարդի որոշակի հիվանդություններով (մասնավորապես, լյարդի ցիռոզով հիվանդների 10-30% -ով), հեմոքրոմատոզով (գունավորված լյարդի ցիռոզով, բրոնզով շաքարախտով):

Հիպոգլիկեմիա (GPG) - արյան գլյուկոզի նվազում - առավել հաճախ կապված է արյան մեջ ինսուլինի մակարդակի բացարձակ կամ հարաբերական բարձրացման հետ: Extrapancreatic hypoglycemia- ն նշվում է որպես լյարդի մեջ գլիկոգենոլիզի և գլիկոնեոգենեզի պրոցեսների ծանրության միջև անհավասարակշռության հետևանքով սուր և քրոնիկ հեպատիտների, ցիռոզի, լյարդի սուր և ենթամաշկային դիստրոֆիայի, ալկոհոլային թունավորումների, մկնդեղի, ֆոսֆորի, թունավորումների հետ լյարդի սուր և քրոնիկ հեպատիտներում . Արյան գլյուկոզի համակենտրոնացման նվազումը հաճախ նկատվում է այն հիվանդների մոտ, ովքեր տառապում են էքստրագիայի քաղցկեղից և այլ ենթաստամոքսային գեղձի տեղայնացման այլ չարորակ ուռուցքներից (ֆիբրոոմա, ֆիբրոարսոմա, նևրոա), ինչպես նաև աննկատելի փսխումներով, անորեքսիայով, հեպատիկ շաքարախտով, ուրեմիա, արհեստական լակտացիա և հղի կանանց մոտ գլյուկոզուրիա:

Հիպոգլիկեմիան կարող է լինել կենտրոնական ծագման `հոգեկան տրավման, էնցեֆալիտի, սուբարախնոիդային արյունազեղման, ուղեղի ուռուցքի պատճառով:

1. Ածխաջրերի յուրացման ժառանգական խանգարումներ:

2. Ձեզ մոտ հայտնի են հիպերգլուկոզեմիայի ո՞ր տեսակները:

3. Որո՞նք են պաթոլոգիական հիպերգլուկոզեմիայի պատճառները:

4. Ո՞րն է ինսուլին կախված շաքարախտի պատճառը:

5. Որո՞նք են ժառանգական հիվանդությունների կենսաքիմիական պատճառները. Ա) գլիկոգենոզ: բ) ագրիկոգենոզ: գ) ֆրուկտոզեմիա: դ) գալակտոզեմիա:

6. Որո՞նք են ածխաջրերի նյութափոխանակության կենսաքիմիական փոփոխությունները ծոմ պահելու ընթացքում:

7. Գլյուկոզի հանդուրժողականությունը որոշելու մեթոդի սկզբունքը:

Երբ է նախատեսված գլյուկոզա օքսիդազի մեթոդը:

Այս թեստը օգտագործվում է խանգարված շաքարի հանդուրժողականությունը և կանխարգելիչ հիվանդությունների զարգացմանը, ինչպես նաև հիվանդության բարձրության վրա հայտնաբերելու համար: Բայց նման նպատակների համար վերլուծությունը հազվադեպ է օգտագործվում, դա պայմանավորված է դրա բարձր գնով և արդյունքի երկար սպասումով: Ամենից հաճախ, այս մեթոդով արյան և մեզի մեջ գլյուկոզի որոշումը օգտագործվում է այնպիսի հիվանդությունների դիֆերենցիալ ախտորոշման մեջ, ինչպիսիք են.

Շաքարն անմիջապես իջեցվում է: Ժամանակի ընթացքում շաքարախտը կարող է հանգեցնել հիվանդությունների մի ամբողջ փունջ, ինչպիսիք են տեսողության հետ կապված խնդիրները, մաշկի և մազերի պայմանները, խոցերը, գանգրենային և նույնիսկ քաղցկեղային ուռուցքները: Մարդիկ դառը փորձ էին սովորեցնում ՝ իրենց շաքարի մակարդակը նորմալացնելու համար: կարդացեք

լակտոզայի անհանդուրժողականության համախտանիշ,
ֆրուկտոզայի անհանդուրժողականություն,
ֆրուկտոզայի սեկրեցումը մարմնի հեղուկներով,
մեզի մեջ պենտոզայի համակենտրոնացման բարձրացում:

Գլյուկոզի օքսիդազի թեստի անկասկած առավելությունը դրա ճշգրտությունն է:

Ո՞րն է այս մեթոդի հիմքը:

Արյան մեջ գլյուկոզայի կոնցենտրացիան որոշելու համար կան տարբեր մեթոդներ, բայց գլյուկոզի օքսիդազը առավել ճշգրիտ է: Այն հիմնված է այն փաստի վրա, որ մթնոլորտային թթվածնի հետ շաքարի փոխազդեցության ընթացքում ռեակտիվը օքսիդացվում է: Hydրածնի պերօքսիդը ազատվում է լուծույթում: Այս նյութը փոխազդում է orthotoluidine- ի հետ ՝ գունավոր միացություն կազմելու համար: Այս ռեակցիայի պահվածքի համար անհրաժեշտ է հատուկ ֆերմենտների առկայություն: Օքսիդացման ռեակցիայի ընթացքում պետք է առկա լինի գլյուկոզա օքսիդազ, իսկ հեղուկը կլանելիս պերօքսիդազը պետք է լինի: Լուծման գունային ինտենսիվությունը կախված կլինի գլյուկոզի պարունակությունից և առավել ինտենսիվ կլինի նրա բարձր պարունակությամբ:

Գլյուկոզի օքսիդազի գլյուկոզի որոշման էությունը

Արդյունքի գնահատումը տեղի է ունենում նույն ժամանակահատվածից հետո լուսաչափության քանակական մեթոդի կիրառմամբ: Պարտադիր է օգտագործել կալիբրացման լուծույթ, որը պարունակում է որոշակի հայտարարագրված շաքարի նորմ, և դրանից բխողից դուք կարող եք դատել գլյուկոզի կոնցենտրացիան մարմնի հեղուկներում, հաճախ ՝ արյան մեջ:

Ինչպե՞ս է իրականացվում վերլուծությունը:

Նյութը հիվանդից վերցվում է դատարկ ստամոքսի վրա: Թեստի համար երակային արյունը օգտագործվում է 5 մլ քանակությամբ: Ախտորոշման նախօրեին հիվանդին ցուցադրվում է խիստ դիետա: Սա հնարավորություն կտա դատել արդյունքի հուսալիությունը և բացառել հնարավոր վերլուծության սխալները: Արյուն վերցնելուց 2 օր առաջ հիվանդը պետք է հրաժարվի ալկոհոլ խմելու և ծխելու վատ սովորություններից: Անհրաժեշտ է նաև սահմանափակել չափազանց քաղցր սննդի ընդունումը և հնարավորության դեպքում խուսափել սթրեսային իրավիճակներից:

Շաքարով պլազմ ձեռք բերելու համար արյունը կենտրոնացված է:

Ամենից հաճախ, գլյուկոզի կոնցենտրացիայի որոշման այս մեթոդը կատարվում է ցենտրիֆուգացման միջոցով, որի ձևի տարրերը մեկուսացված են: Շաքարի քանակը արդեն որոշված է պլազմայում: Երբ դրան ավելացվում են բոլոր անհրաժեշտ ռեակտիվները, գույնը նկատվում է 20 րոպե հետո, եթե թեստը կատարվում է սենյակային ջերմաստիճանում: Գլյուկոզի հաշվարկն իրականացվում է ըստ չափագրման ժամանակացույցի կամ օգտագործելով մատուցման կանոն:

Հետազոտական ռեակտիվներ

Շաքարը որոշելու համար առավել հարմար է օգտագործել արյան մեջ գլյուկոզի որոշման համար պարզ մեթոդներ: Դա պայմանավորված է օգտագործման հեշտությամբ և արագ արդյունքով: Բացի այդ, հիվանդը կարիք չունի լաբորատորիա կամ հիվանդանոց գնալ: Բայց ի տարբերություն գլյուկոզի օքսիդազի թեստի, նման ախտորոշումը անվստահելի է: Քանի որ այն չի տարբերակում գլյուկոզան այլ շաքարներից և միասին որոշում է դրանց համակենտրոնացումը:

Գլյուկոզա օքսիդազի ռեակցիայի հիմքը նատրիումի քլորիդ 9% լուծույթն է, իսկ ցինկի սուլֆատը `50%: Դրանք ավելացվում են արյան ցենտրիֆուգացման փուլում: Բացի այդ, օգտագործվում է քացախաթթվով և նատրիումի ացետատով բուֆերային լուծույթ: Տիտրման մեթոդը որոշում է դրա pH- ն 4.8-ում: Դրանից հետո ավելացվում է գլյուկոզա օքսիդազ, որի պատճառով ազատվվում են ջրածնի պերօքսիդը և պերօքսիդազը, որը ճշգրիտ արդյունք ստանալու համար մասնակցում է ցանկալի կոնցենտրացիայի լուծույթը ներկելուն:

Վերլուծության նորմեր

Շաքարի չափումը տեղի է ունենում հատուկ ստորաբաժանումներում `մեկ լիտր լուծույթի millimoles:

Գլյուկոզա օքսիդազի արյան ստուգումը պարտադիր է դատարկ ստամոքսի վրա և դրա համար օգտագործեք պլազմա կամ շիճուկ: Մեծահասակների համար դրա քանակի նորմը ինչպես կանանց, այնպես էլ տղամարդկանց կազմում է 3.3-5.5: 15 տարեկանից ցածր երեխաների համար այս ցուցանիշը փոքր-ինչ ցածր է և տատանվում է 3.2-5.3-ի սահմաններում: Նորածինների մոտ արյան գլյուկոզան 1,7-4,2 է: Indicatorsուցանիշների աճ նկատվում է շաքարային դիաբետով հիվանդի կամ գլյուկոզի հանդուրժողականության թույլ տեսողություն ունեցող հիվանդի զարգացման հետ: Այս պայմանը նախաբախտ է, և եթե ժամանակին չմշակվի, դա շուտով կհանգեցնի այս ծանր պաթոլոգիայի զարգացմանը:

Դեռևս անհնար է թվում շաքարախտը բուժելը:

Դատելով այն փաստից, որ դուք այժմ կարդում եք այս տողերը, արյան բարձր շաքարի դեմ պայքարում հաղթանակը դեռ ձեր կողմից չէ:

Եվ արդեն մտածե՞լ եք հիվանդանոցային բուժման մասին: Հասկանալի է, քանի որ շաքարախտը շատ վտանգավոր հիվանդություն է, որը, եթե չի բուժվում, կարող է հանգեցնել մահվան: Մշտական ծարավ, արագ միզացում, մթության տեսողություն: Այս բոլոր ախտանիշներն առաջին հերթին ծանոթ են ձեզ համար:

Բայց հնարավո՞ր է բուժել պատճառը, այլ ոչ թե էֆեկտը: Առաջարկում ենք հոդված կարդալ շաքարախտի ընթացիկ բուժման վերաբերյալ: Կարդացեք հոդվածը >>